果實(shí)開裂是自然界中的常見現(xiàn)象，從進(jìn)化上來講“瓜熟蒂落"有助于種子的傳播和植物的繁衍。從產(chǎn)業(yè)上來講，田間和采后的果實(shí)開裂，都將大大降低經(jīng)濟(jì)效益和消費(fèi)價(jià)值。

果實(shí)開裂造成巨大產(chǎn)量損失（左：田間裂瓜導(dǎo)致減收或絕收；右：西瓜豐收對(duì)比）

   從另一個(gè)方面講，果皮的耐裂性與果肉品質(zhì)緊密連鎖，導(dǎo)致了“耐裂品種不優(yōu)質(zhì)，優(yōu)質(zhì)品種不耐裂"的現(xiàn)象。因而，西瓜果皮堅(jiān)硬耐裂同時(shí)果肉清脆爽口成為了一個(gè)重要育種目標(biāo)。這樣一來從田間到餐桌，瓜農(nóng)好種、經(jīng)銷商好賣、消費(fèi)者覺得好吃，三全其美。

   經(jīng)過多年研究，浙江大學(xué)農(nóng)業(yè)與生物技術(shù)學(xué)院張明方教授課題組*發(fā)現(xiàn)了與新鮮果實(shí)耐裂相關(guān)的基因，不僅為進(jìn)一步闡明果實(shí)耐裂性機(jī)理提供了新見解，同時(shí)也有利于加速耐裂優(yōu)質(zhì)品種的精準(zhǔn)育種，為通過分子標(biāo)記輔助育種等技術(shù)改良西瓜品種的耐裂性提供了重要的靶標(biāo)基因。

   西瓜皮耐不耐裂，這次找到了評(píng)價(jià)指標(biāo)

   果實(shí)裂果是農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中普遍發(fā)生的現(xiàn)象，嚴(yán)重影響果實(shí)的產(chǎn)量和商品性。西瓜在生產(chǎn)和物流過程中均易出現(xiàn)裂果現(xiàn)象，每年田間和物流階段的產(chǎn)量損失巨大。

   西瓜從唐代經(jīng)古絲綢之路進(jìn)入中國(guó)，也歷經(jīng)自然選擇和人工培育，但卻一直沒有很好的體系評(píng)價(jià)西瓜皮的耐裂性，傳統(tǒng)的育種家采用感官評(píng)價(jià)，捏一把或者刀切一下，這種方法*憑育種者的經(jīng)驗(yàn)，育種效率低，無法解析果實(shí)耐裂機(jī)制，也很難打破“耐裂品種不優(yōu)質(zhì)"的桎梏。

   如何把耐裂性狀用一個(gè)數(shù)值標(biāo)記出來，是張明方課題組這次研究的di一個(gè)亮點(diǎn)。他們通過質(zhì)構(gòu)儀選用不同形狀的探頭，測(cè)量了果皮硬度、破裂性、破裂率、破裂力做功等8個(gè)不同評(píng)價(jià)指標(biāo)。這些測(cè)量數(shù)據(jù)既涵蓋了傳統(tǒng)耐裂性判斷的指標(biāo)，更包含了很多傳統(tǒng)方法無法測(cè)量的指標(biāo)。“準(zhǔn)確量化耐裂性狀、精準(zhǔn)定位耐裂基因，能為培育耐裂品種提供重要的理論支撐，具有重要科學(xué)意義和應(yīng)用前景。"

 

多個(gè)耐裂性狀指標(biāo)的共定位

   張明方介紹，果皮硬度就是測(cè)量西瓜在破裂瞬間受到的力，破裂性就是機(jī)械穩(wěn)定施壓導(dǎo)致果實(shí)的主動(dòng)破裂情況，破裂率就是同樣力切西瓜，會(huì)形成主動(dòng)破裂周長(zhǎng)。

   根據(jù)這些前期指標(biāo)，科研人員用耐裂性顯著差異的西瓜進(jìn)行雜交，并對(duì)400多個(gè)西瓜F2代開展實(shí)驗(yàn)性狀調(diào)查?？蒲腥藛T在對(duì)159個(gè)隨機(jī)樣本進(jìn)行單株測(cè)序后發(fā)現(xiàn)，所有耐裂相關(guān)指標(biāo)都共同定位到西瓜的10號(hào)染色體上，而果皮硬度數(shù)據(jù)錨定的區(qū)域zui為清晰精確。

   在實(shí)驗(yàn)的空隙，zui有趣的還是一起吃西瓜?！按蠹叶紘鞴献鲅芯?，實(shí)驗(yàn)后就圍著吃西瓜，評(píng)瓜品味，有些實(shí)驗(yàn)的靈感就是來自于吃西瓜。"胡仲遠(yuǎn)說。

   西瓜也有血型，這樣的瓜娃子好吃

   在初步鎖定10號(hào)染色體后，課題組創(chuàng)新了單株染色體片段來源分析方法，利用F2個(gè)別在候選區(qū)域發(fā)生重組的個(gè)體以及他們的自交后代F3群體，通過耐裂表型和基因型關(guān)聯(lián)分析縮小候選區(qū)間，鎖定關(guān)鍵基因，科研人員發(fā)現(xiàn)該區(qū)域存在一個(gè)ERF4 基因，是耐裂與否的重要因素。胡仲遠(yuǎn)表示：“只用雜交第三代就能精確定位到基因，這是用傳統(tǒng)基因定位方法無法做到的，都是得益于我們創(chuàng)新的表型評(píng)價(jià)體系和基因挖掘方法。"

   在自然界的不同西瓜種質(zhì)的10號(hào)染色體上，存在兩種類型的等位基因ERF4-a和ERF4-b，與本實(shí)驗(yàn)的耐裂親本擁有相同的ERF4-a基因的西瓜基本都耐裂；而具有ERF4-b基因的則表現(xiàn)為容易開裂；兼而有之的雜合類型，則表現(xiàn)為果皮堅(jiān)硬，果肉較松脆。張明方用“血型"給這些西瓜樣本打了個(gè)比方，耐裂的如果是A型，那么就可以把不耐裂的比成B型，兼而有之的則是AB型。

通過創(chuàng)新研究方法實(shí)現(xiàn)耐裂基因的快速精準(zhǔn)定位

   由于找到了耐裂性功能基因，課題組很快研發(fā)出分子標(biāo)記物，只要用一點(diǎn)點(diǎn)葉片提取DNA進(jìn)行分析，就可以很快的測(cè)試出西瓜屬于哪個(gè)“血型"。在對(duì)已有的104個(gè)西瓜品種資源進(jìn)行驗(yàn)證后，科研人員發(fā)現(xiàn)西瓜的“血型"可以很好地反映耐裂性。另一方面，張明方團(tuán)隊(duì)還對(duì)市面上銷售的30余份不同西瓜商品種進(jìn)行了檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)只有在設(shè)施栽培的西瓜品種中才會(huì)發(fā)現(xiàn)較多的“B型血"，而露地栽培的西瓜品種，基本上全是純合的A型或雜合的AB型。

   這是因?yàn)椤癇型血"西瓜的果皮容易開裂，在露地栽培很容易受到雨水等不利因素刺激而發(fā)生田間果實(shí)開裂，所以在長(zhǎng)期育種過程中，“B型血"被逐步淘汰了。而在設(shè)施栽培條件下，避雨設(shè)施為西瓜提供了保護(hù)，不耐裂的西瓜也能較好地生長(zhǎng)，育種家們?cè)谶x育優(yōu)質(zhì)品種的過程中，不知不覺地把不耐裂的“B型血"保留了下來，而耐裂的純合“A型血"由于常常聯(lián)鎖果肉較硬這一不良品質(zhì)，就很少被保留在設(shè)施西瓜品種里了。

   “從我們的日常經(jīng)驗(yàn)中也可以發(fā)現(xiàn)，在露天生長(zhǎng)受到風(fēng)吹雨打，西瓜品種的果皮必需更加堅(jiān)韌。"胡仲遠(yuǎn)說，“事實(shí)上在AB型的品種里，更有可能發(fā)現(xiàn)又耐裂又清脆好吃的西瓜。"

   那么是什么讓A型和AB型西瓜更耐裂呢？

   課題組繼續(xù)開展研究，他們發(fā)現(xiàn)ERF4 基因是乙烯信號(hào)途徑的重要轉(zhuǎn)錄因子，從基因進(jìn)化角度和結(jié)構(gòu)特征判斷，該基因很可能調(diào)控細(xì)胞壁木質(zhì)素的生長(zhǎng)和積累?！澳举|(zhì)素就好像細(xì)胞壁的鋼筋，形成銅墻鐵壁，讓細(xì)胞壁更堅(jiān)固、更有韌性和硬度。"張明方說。

功能基因的進(jìn)化分析為功能預(yù)測(cè)和后續(xù)機(jī)理研究提供重要線索

   精準(zhǔn)育種找到新方向

   張明方介紹，功能基因的分子標(biāo)記為育種篩選帶來了新的可能。

在之前如果需要篩選品種，需要大量的人力物力栽培巨大的種群進(jìn)行大量的普查式的性狀研究，而有了分子靶標(biāo)，就可以先對(duì)各類品種資源進(jìn)行苗期篩選，再選擇帶有目標(biāo)基因的少量個(gè)體進(jìn)行田間種植。

   比如耐裂優(yōu)質(zhì)西瓜的選育，我們不再需要在每個(gè)世代開展耐裂性選擇，只需選擇出A或AB血型的材料再開展田間種植，再?gòu)闹羞x育果肉品質(zhì)佳又較耐裂的個(gè)體繁育后代。這樣不僅可以減少每季的種植量，而且不用擔(dān)心耐裂基因在育種過程中“丟失"，獲得目標(biāo)品種的時(shí)間也將大大縮短?！皩⒆匀唤缫延械膬?yōu)質(zhì)基因篩選出來，進(jìn)而開發(fā)相關(guān)分子標(biāo)記，可以大大提高育種的精度和速度。"

   不斷發(fā)掘抗逆、抗病、優(yōu)質(zhì)等相關(guān)功能基因，并利用分子標(biāo)記輔助育種技術(shù)，將各種有益性狀高效地集合到我們的育種材料中，選育出田間-物流-餐桌“三全其美"的西瓜新品種，成為了張明方團(tuán)隊(duì)西瓜精準(zhǔn)育種的新方向。

   本項(xiàng)目受國(guó)家西甜瓜產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系、國(guó)家自然科學(xué)基金等項(xiàng)目支持。