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    釀酒酵母感受態細胞的制備、轉化
    
						
    
							時間：2021/7/28閱讀：4449
							
    
							
				
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     釀酒酵母感受態細胞的制備
     
    （1）從YPD平板上挑取一個新鮮的釀酒酵母EBY100單克隆至10 ml YPD液體培養基，30℃，250 rpm 培養過夜。
    （2）測定過夜培養物的OD600值為3.0~5.0之間。
    （3）將10 ml YPD過夜培養物稀釋至OD600值為0.2~0.4。
    （4）在28~30℃搖床中繼續培養3~6 hr，使其OD600值達到0.6~1.0。
    （5）于室溫1500 g 離心5 min 收集酵母細胞，棄上清。
    （6）用10 ml 洗液洗酵母細胞，隨后于室溫1500 g 離心5 min離 心收集細胞，棄上清。
    （7）用1 ml TE/LiAc重懸酵母細胞，以每管50 μl 分裝。
     
    釀酒酵母細胞的轉化
     
    （1）取50 μl 感受態細胞，再加入待轉質粒各2 μl，混勻。
    （2）加入500 μl 轉化用溶液（PEG/LiAc，二甲亞砜），彈擊管壁混勻。
    （3）30℃水浴1 h，隔15min彈擊管壁混勻。
    （4）加入1毫升YPD培養液，30℃搖床培養1小時。
    （5）3500 g 離心5 min ，留沉淀，棄上清。
    （6）沉淀用150 μl TE重懸，涂相應的SD平板；將平板倒置于30℃培養。
    
							
							
							
						
    
					
    
				
    
			
    
		
    
		
		
		
		 



  
    
    				
			

		
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    

    

     
     
     
	 




	 
	
	
	

    
	
    
		
    
			
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