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釀酒酵母感受態細胞的制備、轉化

時間：2021/7/28閱讀：4449
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 釀酒酵母感受態細胞的制備

 
（1）從YPD平板上挑取一個新鮮的釀酒酵母EBY100單克隆至10 ml YPD液體培養基，30℃，250 rpm 培養過夜。
（2）測定過夜培養物的OD600值為3.0~5.0之間。
（3）將10 ml YPD過夜培養物稀釋至OD600值為0.2~0.4。
（4）在28~30℃搖床中繼續培養3~6 hr，使其OD600值達到0.6~1.0。
（5）于室溫1500 g 離心5 min 收集酵母細胞，棄上清。
（6）用10 ml 洗液洗酵母細胞，隨后于室溫1500 g 離心5 min離 心收集細胞，棄上清。
（7）用1 ml TE/LiAc重懸酵母細胞，以每管50 μl 分裝。
 
釀酒酵母細胞的轉化
 
（1）取50 μl 感受態細胞，再加入待轉質粒各2 μl，混勻。
（2）加入500 μl 轉化用溶液（PEG/LiAc，二甲亞砜），彈擊管壁混勻。
（3）30℃水浴1 h，隔15min彈擊管壁混勻。
（4）加入1毫升YPD培養液，30℃搖床培養1小時。
（5）3500 g 離心5 min ，留沉淀，棄上清。
（6）沉淀用150 μl TE重懸，涂相應的SD平板；將平板倒置于30℃培養。

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