HPLC測定番石榴葉及其消渴*中槲皮素的含量

摘要： 目的采用HPLC測定番石榴葉及其制劑消渴*中槲皮素的含量。方法KromasilC18色譜柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動相：甲醇-0.4%，磷酸溶液（55：45）；檢測波長：372nm。結果槲皮素在0.1～1.0μg范圍內具有良好的線性關系，相關系數(shù)r=0.9999，平均加樣回收率101.07％，RSD=1.37％（n=5）。結論方法簡便、準確、重現(xiàn)性好，可作為番石榴葉及其制劑消渴*中槲皮素的含量測定方法。
    關鍵詞： 番石榴葉；消渴*；槲皮素； 液相色譜法；含量測定
    番石榴葉為桃金娘科植物番石榴Psidium guajavaL．的干燥葉及帶葉嫩莖，分布于華南各地至四川西南部，含有β-谷甾醇、槲皮素、番石榴苷、無色矢車菊素、番石榴酸等成分。現(xiàn)代藥理研究表明，番石榴葉提取出的總黃酮苷及單黃酮苷具有降血糖作用；其單味藥制劑消渴*收載于《衛(wèi)生部藥品標準中藥成方制劑》第十五冊，用于輕度及中度成年糖尿病的治療。番石榴葉及其制劑的含量測定未見報道，本實驗采用液相色譜法對番石榴葉及消渴*中槲皮素的含量進行了測定，取得滿意的結果。
    1 儀器與試藥
    /液相色譜儀/，515泵，2487紫外檢測器（美國Waters公司）；N-2000色譜工作站（浙江大學）；TU-1900紫外分光光度計（北京普析通用儀器有限公司）。槲皮素對照品由中國藥品生物制品檢定所提供（批號0081-9905）：番石榴葉為市場所購（產地廣西）；消渴*為廣西醫(yī)科大學制藥廠提供。水為雙蒸水，甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純。
    2 方法與結果
    2．1 色譜條件
    色譜柱：Kromasil C18（250mm×4.6mm，5μm）；流動相：甲醇-0.4％磷酸溶液（55：45）；檢測波長：372nm；流速：l.0mL／min：柱溫：30℃；進樣量：10μL。
    2．2 測定波長的選擇
    取槲皮素對照品的甲醇溶液置紫外分光光度計中進行光譜掃描，其zui大吸收波長為372nm，與文獻報道的371nm基本一致，故選擇372nm作為測定波長。
    2．3 線性關系的考察
    精密吸取濃度為0.1008mg／mL的槲皮素對照品溶液1、2、4、6、8、10mL，分別置1OmL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。精密吸取10μL進樣，測定其峰面積積分值，以濃度為橫坐標，峰面積積分值為縱坐標，繪制標準曲線。其槲皮素回歸方程為：A=1315133.149×C-7744.002，相關系數(shù)r=O．9999。結果表明，槲皮素在0.1～1.0μg范圍內具有良好的線性關系。
    2，4 穩(wěn)定性試驗
    分別精密吸取同一供試品溶液（20030101），于0、3、6、9、12h進樣，測定槲皮素峰面積積分值。結果表明，12 h內峰面積積分值無大的變化，RSD=O.51％。
    2．5 精密度試驗
    精密吸取同一供試品溶液（20030101），重復進樣5次，測定槲皮素峰面積積分值，其RSD=0.46％。
    2．6 重現(xiàn)性試驗
    取同一批樣品（20030101）5份，平行提取5份，測定槲皮素平均含量為0.7431mg／粒，RSD=1.37％。
    2．7 加樣回收試驗
    采用加樣回收法，精密稱取已測定含量的同一批號樣品（20030101）5份，每份0.5g，分別精密加入濃度為0.0872mg／mL槲皮素對照品溶液l5mL和甲醇35mL，按樣品測定項下游離槲皮素的含量測定方法處理，測定含量，并計算回收率。
    2．8 樣品測定
    2．8．1 游離槲皮素 取消渴*10粒內容物，精密稱定，混勻，取約1g，精密稱定，精密加入甲醇5OmL，稱定重量，置水浴上加熱回流30min，放冷，再稱定重量，加甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，注入液相色譜儀/。
    2．8．2總槲皮素取消渴*內容物約1g，精密稱定，精密加入甲醇一鹽酸（19：1）50mL，同法處理及測定。
    2．9 番石榴葉藥材的測定
    取藥材細粉3g，精密稱定，同上法處理并測定游離槲皮素及總槲皮素含量。
    3 討論
    本實驗采用液相色譜/測定，該法簡單快速，穩(wěn)定準確，其槲皮素峰與相鄰峰分離較好，可作為番石榴葉及消渴*的含量測定方法。番石榴葉總槲皮素含量是游離槲皮素的13倍，由于槲皮素是黃酮苷元，說明番石榴葉中槲皮素主要以結合形式存在于黃酮苷中。
消渴*每粒相當于原藥材3g，以游離槲皮素計算，其轉移率為62％；而以總槲皮素計算，其轉移率只有7.8％。說明消渴*的水煮醇沉工藝欠妥，其有效成分總黃酮苷轉移率太低，這與黃酮苷易溶于醇、較難溶于水的化學性質有關。建議廠家改進生產工藝，采用醇提取，以提高有效成分含量及番石榴葉的利用率。
參考文獻：
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